Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出肝细胞自身免疫球蛋白到显现出1M-肝炎临床研究呕吐的十分困难率在成年人中期就有很好的详细描述，多个肝细胞自身免疫球蛋白白血病的成年人之除此以外70%在血清转换后10年内复发肝炎，而随访15年的成年人这一多于降低到84%。相比之下之下，分之二临床研究1M-肝炎一半以上的M-1M-肝炎的发病的系统还无法取得前提的研究工作。

更加多的人开始应用于分期该系统来度量1M-肝炎的十分困难：幼形体在显现出多种肝细胞自身免疫球蛋白时进到第1前期，显现出血糖异常时进到第2前期，显现出呕吐时进到第3前期。一些多发肝细胞自身免疫球蛋白白血病的幼形体，在1期和2期，十分困难较慢，并转变为发病的1M-肝炎。我们之前详细描述了一第三组在首次检测到多种肝细胞自身免疫球蛋白采样后至少10年无肝炎的太快十分困难者，这第三组症状人数少，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原特异性CD8+T蛋白质反应在十分困难较慢的症状之中必需不长期存在，但在来得进一步发病和长期长期存在的肝炎症状之中很容易检测到。这也许指出，与十分困难症状相比之下，这些症状自身免疫反应的调节增强。

晚期研究工作指出，尽管调节性T蛋白质(Treg)数目正常，但肝炎症状长期存在一些功能缺陷，其之中最主要对IL-2的反应能力降低。此外，肝炎症状之中的振荡CD4+T蛋白质也许对调节来得具抵抗性，表现为振荡T蛋白质的诱发西移动，自然归因于的Treg和形体外归因于的正向Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质之中IL-2反应西移动。本研究工作的目的是详细描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群近于较慢十分困难者之中的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的症状亲友之中核对1M-肝炎的危险因素。我们之前详细描述了长期较慢十分困难者的特征，他们保持多重肝细胞自身免疫球蛋白白血病多达10年，但无法显现出肝炎的临床研究呕吐，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名一直保持无肝炎并愿意提供大量血液采样的较慢十分困难者纳入T和B蛋白质功能归纳。在目前的研究工作之中，8名慢十分困难者(SP第三组)，之中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫球蛋白白血病。所有的行动者都处于1M-肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫球蛋白对某些抗原的白血病反应，然而，一名症状已经处于2期至少6年，但无法显现出临床研究呕吐，一名症状被诊断为肝炎，该人脑72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳之中对该供形体顺利完成了单独评估。分立外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多给定流式蛋白质术和T蛋白质诱发试验评估供形体之中Treg的频谱、表M-和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)顺利完成无监督聚类归纳，评估Treg表M-。

结果：与健康供形体相比之下，来自慢十分困难形体的梦境CD4+T蛋白质的监督聚类结果显示，激已逝的梦境CD4+ Treg频谱降低，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)理解降低有关。一名HbA1c升温的症状与十分困难较慢者和最简单的对照第三组相比之下，Treg谱有所不尽相同。功能归纳指出，与健康供形体相比之下，来自较慢十分困难形体的Treg特异性的CD4+振荡T蛋白质诱发明显毁损。表现为对振荡CD4+T蛋白质CD25和CD134理解的诱发降低。

左图1 深入的表M-归纳结果显示，CD4+Treg亚M-在慢十分困难路由表之中降低。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有供形体的已逝CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标示物理解断定出10个元簇:梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个不尽相同Treg标示分解的10个元簇的MST。每个端口都有一个一个大(100个一个大)，来得大的元一个大(10个元一个大)在端口第三组外围手绘。每个端口之中的饼左图透露单个标示的理解最高级别。(b)每个元聚类的热左图，以结果显示整形体标示理解。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解左图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱点阵左图(丰度> 0.05%)确认为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质(l)。黄色左上方都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应用于CITRUS的预测模M-猜测，Treg频谱的降低是十分困难较慢的标志。分级门控(a - f)和葡萄归纳(g-k)比较SP行动者和最简单的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的都有性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利完成分立，仿真FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)第三组以及供形体SP 606(黄色)之中CD25+ cd127的频谱汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱点阵左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解气压可视，箭头明显的簇被辨认为SP和HD路由表之间的不尽相同。(j)箱点阵左图结果显示了在SP(黑纹)和HD(灰点)第三组之中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比较丰度(多于)。(k)概率分布结果显示每个簇的表M-(深蓝色)和Treg标示比较理解与背景理解(黄色);上列，缓存Treg_3;比如说一路上，缓存Treg_4。背景与所有其他簇之中标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与健康献血者相比之下，十分困难较慢者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T蛋白质元簇(梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的理解热左图(sp606不最主要在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR理解串联，结果显示概率分布(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供形体最主要，p< 0.05(黄色)供形体SP 606和最简单的HD不最主要在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，结果显示概率分布(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自较慢十分困难的CD4+ treg蛋白质控制振荡CD4+T蛋白质的能力降低。SP第三组用黄色的支线和左上方透露，HD第三组用黑色的支线和左上方透露，黄色的支线/左上方透露供形体sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被标示为CFSE, Treg按观察的多于指示剂。用抗CD3 /28微珠已逝化蛋白质，人才3天后顺利完成流式蛋白质术检测。(a-d)与CD4+转发者比较应的treg人才(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。应用于白血病对照(激已逝的响应蛋白质都有treg)计算诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 振荡CD4+T蛋白质对较慢十分困难的T蛋白质已逝化的诱发来得敏感。SP第三组用黄色的支线和左上方透露，HD第三组用黑色的支线和左上方透露，黄色的支线/左上方透露供形体sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示，treg按观察的多于指示剂。用抗CD3 /28微珠已逝化蛋白质，人才3天后顺利完成流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱发多于(b)。(c,d) CD25诱发多于(c)和CD134诱发多于(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们得出的论据是，来自较慢十分困难子的已逝化梦境CD4+Treg在GITR理解之中取得了扩展和多样化，强调了进一步研究工作Treg在1M-肝炎风险幼形体之中的异质性的必要性。

原意引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28