Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出肾脏自身肝细胞到显现出1改进型乳癌诊断病因的的发展率在儿童中后期就有不太好的描述，多个肾脏自身肝细胞阳性的儿童中都有70%在血液转换后10年内罹患乳癌，而随访15年的儿童这一比例减少到84%。来得之下，占到诊断1改进型乳癌一半以上的改进型1改进型乳癌的发病机制还不会得到充分的研究小组。

愈发多的人开始适用分期系统来定义1改进型乳癌的的发展：母体在显现出多种肾脏自身肝细胞时转到第1阶段，显现出血糖异常时转到第2阶段，显现出病因时转到第3阶段。一些多发肾脏自身肝细胞阳性的母体，在1期和2期，的发展较迟，并发展为发病的1改进型乳癌。我们以后描述了一四组在首次验证到多种肾脏自身肝细胞结果推断后至少10年无乳癌的很迟的发展者，这四组症状人数少，但必需特征非常明确。随后，我们挖掘出肾脏自身肝细胞肝细胞CD8+T巨噬细胞质孙子化在的发展减迟的症状中都必需不存在，但在近期发病和长期存在的乳癌症状中都很容易验证到。这意味著指出，与的发展症状来得，这些症状自身免疫质孙子化的调节弱化。

早期研究小组指出，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但乳癌症状存在一些功能性缺陷，其中都包括对IL-2的质孙子化灵活性降低。此外，乳癌症状中都的震荡CD4+T巨噬细胞意味著对调节兼具抵抗性，观感为震荡T巨噬细胞的抑制作用减弱，自然导致的Treg和体外导致的正向Treg，以及肝细胞经历的CD4+T巨噬细胞中都IL-2质孙子化减弱。本研究小组的用以是描述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极减迟的发展者中都的必需特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究小组是一项以人群为基础的纵向研究小组，在21岁以下确诊的症状亲人中都心理健康检查1改进型乳癌的危险原因。我们以后描述了长期减迟的发展者的必需特征，他们维持多重肾脏自身肝细胞阳性最多10年，但不会显现出乳癌的诊断病因，迟性或非进行性自身免疫。随后，10名继续维持无乳癌并愿意提供大量血液结果推断的减迟的发展者归属于T和B巨噬细胞功能性分析。在目前的研究小组中都，8名迟的发展者(SP四组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身肝细胞阳性。所有的旁观者都西北面1改进型乳癌的发展的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身肝细胞对某些肝细胞的阳性质孙子化，然而，一名症状已经西北面2期至少6年，但不会显现出诊断病因，一名症状被诊断为乳癌，该人脑72岁，在采自鉴定结果推断时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在研究小组中都对该丝氨酸进行了之外评估。转化外周血单个核分裂巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞抑制作用试验评估丝氨酸中都Treg的基频、表改进型和功能性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)进行无监督聚类分析，评估Treg表改进型。

结果：与心理健康丝氨酸来得，来自迟的发展体的无意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，酪氨酸的无意识CD4+ Treg基频减少，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)表示减少有关。一名HbA1c升高的症状与的发展减迟者和匹配的对应四组来得，Treg五音并不相同。功能性分析指出，与心理健康丝氨酸来得，来自减迟的发展体的Treg抑制的CD4+震荡T巨噬细胞抑制作用明显受损。观感为对震荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表示的抑制作用减少。

上图1 险恶的表改进型分析推断，CD4+Treg亚改进型在迟的发展数据流中都减少。由FlowSOM聚合的Treg室，涌进在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物表示鉴别出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个并不相同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个结点代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在结点四组一处上色。每个结点中都的饼上图坚称单个上面的表示级别。(b)每个元聚类的热上图，以推断整体上面表示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)聚合上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对总质量为每个metacluster木箱两条路线上图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。紫色圆圈代表捐赠者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩鉴定。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模改进型证明，Treg基频的减少是的发展减迟的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示进行转化，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及丝氨酸SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的基频概述上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控孙偏序的木箱两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD数据流错综复杂的并不相同。(j)木箱两条路线上图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对总质量(比例)。(k)直方上图推断每个簇的表改进型(粉红色)和Treg上面相对表示与氛围表示(白色);上列，闪存Treg_3;示例一行，闪存Treg_4。氛围与所有其他簇中都上面的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩鉴定

上图3 与心理健康献血者来得，的发展减迟者无意识treg的GITR减少。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表示上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表示热上图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表示串联，推断直方上图(c)和概述上图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和鉴定，p< 0.07(紫色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(白色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)串联，推断直方上图(e)和概述上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩鉴定

上图4 来自减迟的发展的CD4+ treg巨噬细胞支配震荡CD4+T巨噬细胞的灵活性降低。SP四组用白色的两条路线和圆圈坚称，HD四组用粉红色的两条路线和圆圈坚称，紫色的两条路线/圆圈坚称丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按检视的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培训3同月进行流式巨噬细胞术验证。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培训(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑制作用多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用多于。适用阳性对应(酪氨酸的四组织起来巨噬细胞不含treg)计算抑制作用多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 震荡CD4+T巨噬细胞对减迟的发展的T巨噬细胞还原的抑制作用更敏感。SP四组用白色的两条路线和圆圈坚称，HD四组用粉红色的两条路线和圆圈坚称，紫色的两条路线/圆圈坚称丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按检视的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培训3同月进行流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因孙子分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培训。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑制作用多于(b)。(c,d) CD25抑制作用多于(c)和CD134抑制作用多于(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授中都的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得出的论断是，来自减迟的发展孙子的还原无意识CD4+Treg在GITR表示中都得到了引入和丰富，强调了全面研究小组Treg在1改进型乳癌效用母体中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28